贝博®BBcellProbe®细胞膜染色试剂DiI（BB-441916）是一种橙色荧光标记的细胞膜探针，其最大激发波长为549nm，发射波长为565nm。这款荧光探针具有优异的染料稳定性，能够清晰地标记细胞膜，适合用于细胞运动监测和细胞定位分析。

DiI通过与细胞膜中的脂质分子结合来标记细胞。在最佳浓度下，该染料可以有效地对整个细胞膜进行染色。未进入细胞膜时，染色液的荧光非常微弱，但一旦与细胞膜结合，荧光强度会显著增强，激活后能够发出明亮的橙色荧光，具有较高的淬灭常数和激发态寿命。

由于荧光探针DiI对细胞活力无明显影响，因此被广泛应用于活细胞或固定细胞的示踪研究，适用于神经细胞等多样化细胞类型的长时间示踪（long-term tracer）。除基本的细胞膜荧光标记外，DiI还可用于检测细胞融合、粘附以及细胞迁移。此外，通过FRAP（荧光恢复后光漂白技术），研究者可以分析脂质在细胞膜内的扩散情况，进而评估细胞毒性和标记脂蛋白等。

在工作浓度下，DiI对细胞无毒性，不会影响细胞的活力及增殖能力。检测方法包括激光共聚焦显微镜、荧光显微镜和流式细胞仪，样本类型涵盖悬浮细胞和贴壁细胞。

染色工作液的配制

为制备染色工作液，应根据样本数量用HBSS或无血清培养基等缓冲液将探针DiI稀释至500-2500倍。

细胞染色步骤

悬浮细胞染色

1. 用PBS洗涤细胞2次。

2. 加入适量的染色工作液重悬细胞。

3. 在37℃孵育细胞，根据不同细胞类型优化孵育时间，起始时间可设为20分钟。

4. 孵育结束后，离心5分钟，倾倒上清液，加入37℃预热的培养基重悬细胞。

5. 重复上述步骤两次以上以确保染色均匀。

贴壁细胞染色

1. 用PBS洗涤细胞2次。

2. 在细胞培养板或细胞爬片上加入适量的染色工作液。

3. 在37℃孵育细胞，起始孵育时间可设为20分钟，后续根据实验结果调整。

4. 吸干染色工作液，并用预热的培养基清洗细胞，吸干培养基。

5. 用荧光显微镜或流式细胞仪检测，激发波长为549nm，最大发射波长为565nm。

通过这些步骤，研究者能够灵活地使用人生就是博-尊龙凯时的DiI荧光探针，进行多种生物医学研究，帮助探索细胞行为及其动力学特性。