人生就是博-尊龙凯时提供的人骨肉瘤细胞HOS培养说明书如下，旨在为研究与实验提供清晰的指导。

一、细胞培养条件

细胞名称：人骨肉瘤细胞HOS。
生长特性：贴壁生长。
冻存条件：使用无血清冻存液。
培养体系：MEM+10%FBS+1%NEAA+1%P/S。
传代方法：首次建议采用1:2的传代比例。
传代情况：每两天更换培养基。
备注：请使用无菌离心管收集培养基，以便进行对比培养。如果对比效果不理想，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞处理

收到细胞后，待其培养至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，首先用75%酒精喷洒整个细胞瓶以进行消毒，然后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续操作。显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照后保存（建议分别拍摄40x、100x和200x），前三天的观察照片是重要的售后依据，若未提供照片则默认为细胞状态良好。建议在传代后，一瓶使用原有的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，换液时请将瓶盖稍松。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞的汇合度未超过80%，请将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基于37℃、5%CO2的孵箱中培养。若细胞密度超过80%，即可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况；若细胞大部分变圆并脱落，迅速返回操作台轻轻敲打培养瓶，加入5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶，补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养瓶内的培养液，使用PBS清洗细胞一次。
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打使其脱落，将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存；若需转入液氮罐，需先在-80℃中存放24小时以上后再转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护设备），快速将其置于37℃水浴中解冻，直至管内无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，一些细胞可能会因贴壁不牢而脱落，这是正常现象。若脱离较多，请将培养瓶内的所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养。当进行重悬时，加入胰酶1-2ml，轻轻吹打消化1-2分钟后加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），并补充新培养基至5-8ml/瓶。

五、售后条款

1）细胞出现问题，哪些情况可以重发？判定标准：
1. 运输途中细胞丢失、瓶体破损、培养液严重泄漏等情况，均可重发。
2. 细胞污染问题，需在产品收到48小时内提出真实的实验结果，确认后可重发。
3. 常温发货的细胞在静置24小时后，或干冰冻存的细胞复苏后24小时未存活（需提供清晰的细胞状态照片），可重发。
4. 若冻存细胞复苏后24小时内或常温发货细胞静置4小时后未开封出现污染，可重发。
5. 活性问题需在收到产品7天内提出真实实验结果，并用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，确认后可重发。
6. 收到细胞当天及第2、3天需拍照，若3天内未告知，则视为产品合格。在4-7天内如出现问题，需提供前3天照片及操作过程，技术人员会进行判断，重发情况将根据责任判定而定。

2）出现问题不予重发的情况包括：
1. 客户造成的细胞污染。
2. 客户操作不当导致细胞状态不佳。
3. 使用非本实验室推荐的细胞培养体系导致问题。
4. 未提供细胞培养前3天的照片。
5. 细胞培养过程中经其它处理。
6. 收到细胞后2天内未反馈。
7. 具体情况将视问题而定。

通过以上指导，人生就是博-尊龙凯时希望能帮助您成功培养出健康的人骨肉瘤细胞HOS，为您的研究提供支持。