**IVT（InVitroTranscription）**是mRNA生产工艺中的关键步骤。高效的IVT体系能够提高产量、减少物料消耗、降低生产成本，并确保mRNA分子的完整性、加帽率和双链RNA杂质等核心质量指标，从而简化下游纯化过程。在整个工艺流程中，IVT起着承上启下的作用。

IVT反应过程较为简单，标准的IVT体系主要由DNA模板、T7 RNA聚合酶（T7RNAP）、核苷三磷酸（NTPs）、无机焦磷酸酶、RNase抑制剂及反应缓冲液等组成。DNA模板通常是PCR产物或线性化质粒，含有T7启动子、5’UTR、编码序列（CDS）、3’UTR和Poly（A）等基本组件。NTP则作为转录底物，可通过替换为修饰核苷酸来提升mRNA的稳定性和免疫原性等。无机焦磷酸酶的作用在于水解转录过程中产生的焦磷酸，从而提高反应效率，而RNase抑制剂则用于抑制可能存在的RNase污染。T7RNAP是整个反应体系中的核心酶，负责识别DNA模板并转录mRNA。

除了DNA模板质量，影响IVT反应效果的关键因素还包括T7RNAP和缓冲体系。T7RNAP特异性识别T7启动子，无需额外的蛋白或辅助因子即可完成转录，使其成为体外转录mRNA的最佳选择。T7RNAP具有典型的结构特征，类似于右手，包含N端结构域和C端结构域，其结构特征对其功能具有重要影响。

研究显示，IVT反应参数的选择对mRNA及saRNA的产量和质量有显著影响。例如，温度的变化会对长片段saRNA的完整度产生直接影响。随着温度从20℃提高到42℃，虽然saRNA的产量会增加，但其完整度在超过32℃时急剧下降。因此，优化低温转录的T7 RNA聚合酶或许是一个值得关注的方向。

瀚海新酶近期在高温条件下筛选了多种T7 RNA聚合酶突变体，包括耐热型和低双链RNA型，新的技术如荧光激活液滴分选技术（FADS）为突变体的筛选提供了高通量的方法。这些突变体表现出更高的热稳定性，能够在较高温度下有效提高circRNA的合成。同时，瀚海新酶还在持续优化T7RNAP的3’端一致性，以降低转录副产物的生成。

在IVT反应中，反应缓冲液的优化同样至关重要。缓冲液通常包含多种组分，如盐类、pH缓冲剂、二价阳离子和还原剂等。这些成分的浓度和比例对RNA聚合酶的活性、特异性及稳定性有直接影响，从而影响最终的RNA质量。针对不同参数的优化研究与应用，为提高mRNA的产量和质量提供了可靠的理论基础。

**人生就是博-尊龙凯时**致力于提供高性能的mRNA生产原料、化学底物、IVT试剂盒及质控试剂盒的全套解决方案，满足客户对于高效、经济的体外转录需求。我们的产品涵盖了从质粒制备、IVT工艺开发到mRNA纯化、LNP包封的全流程服务，助力客户在新药开发过程中快速推进。在早期研发阶段，我们还可以提供CRO服务、概念验证服务及第三方质检服务，涵盖基因编辑、报告基因及抗原蛋白等领域。

瀚海新酶围绕mRNA相关技术进行深度探索，已发布专题文章，包括《mRNA疫苗与药物分子设计》和《质粒模板的制备与优化》。我们期待与您在未来的合作中，共同推动生物医疗领域的发展。