人生就是博-尊龙凯时的细胞培养说明书提供了详细的细胞培养和冻存指导，确保实验顺利进行。

一、细胞培养条件

细胞名称：生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S + 1% 丙酮酸钠 + 1% L-谷氨酰胺

传代方法：首次传代建议比例为1:2。传代后2天内需更换培养液。

备注：使用无菌离心管收集培养基，作为对比培养的过渡。若对比培养效果不佳，建议直接使用人生就是博-尊龙凯时提供的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

在细胞恢复到良好状态后，将完全培养液灌满并密封瓶口，确保运输过程中的细胞稳定。收到细胞后，使用75%酒精喷洒整瓶细胞进行消毒，之后在超净台内进行严格的无菌操作。然后，将细胞瓶放置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，随后进行处理。显微镜下观察细胞生长情况，并记录不同倍数的照片（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片为售后服务的重要依据。若未提供照片，则默认接受状态良好。为了进行对比培养，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，在换液后将瓶盖稍微松动。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

在细胞汇合度未超过80%时，将瓶内培养液收集至离心管，留出5ml的完全培养基继续培养；若细胞密度超过80%，可进行传代，步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。若细胞大多数变圆并脱落，立即将其轻轻敲打后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，并将悬液转移至离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，去除上清液后补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶，补充新的完全培养基至5-8ml，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞收缩情况，待其回缩后加入5ml的完全培养基以终止消化，然后轻轻吹打细胞脱落，转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 去除上清，沉淀细胞后加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混合后装入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如果后续需转入液氮罐中，需在-80℃下存放24小时以上后再转入液氮。

四、细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管时，请注意佩戴防护面具，快速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶后，用75%酒精擦拭外壁；将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟；去除上清，使用5ml完全培养基重悬后接种至T25培养瓶，培养于37℃、5% CO2细胞培养箱中。第二天更换新鲜的完全培养基以继续培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题的重发情况

以下情况下可申请重发：

1. 细胞在运输途中失效，导致细胞丢失、瓶身破损或培养液严重漏液。
2. 48小时内报告细胞污染问题并提供真实实验结果经核实后重发。
3. 常温发货的细胞在静置24小时后，干冰冻存发货的细胞在复苏后24小时内，大多数细胞未存活，并需提供清晰的细胞状态照片。
4. 复苏后24小时内或常温发货细胞静置4小时并未开封发现污染情况。
5. 如细胞活性问题，需在收到产品7天内提供真实实验结果，经过蓝染法鉴定细胞活力，并核实后进行重发。
6. 收到细胞当天及第2、3天的照片记录，3天内未告知视为产品合格。
7. 4-7天内出现问题，需提供前三天的照片与相关操作详细步骤，由技术人员判定责任。

2）细胞出现问题的不予重发情况

以下情况不予重发：

1. 客户本人造成的细胞污染。
2. 客户不当操作导致细胞状态不佳。
3. 采用非本库推荐的细胞培养体系而导致的问题。
4. 未提供细胞培养前3天照片，导致细胞状态不良的案例。
5. 细胞在培养过程中有其他处理的情况。
6. 收到2天内未及时反馈的问题。

在使用人生就是博-尊龙凯时细胞培养系统时，请严格遵循操作流程，以确保细胞的培养质量及稳定性。