这里简单介绍一种细胞培养的方法,通过将培养基中的血清(FBS)降低到0-1%,促使细胞从“自助餐”模式转向“轻断食”。血清中含有丰富的生长因子,去除后细胞会自然而然地停留在G0/G1期,就像是按下了暂停键⏸️,这为后续实验提供了更多可能性。
1. 提高细胞同步性
通过饥饿细胞12-24小时,超过90%的细胞会在G0/G1期内同步,消除了细胞间的不同步现象,避免了数据的波动。在检测Cyclin D1、p27等周期蛋白时,结果非常理想📈。
2. 激活凋亡与自噬
在应激研究中,撤掉血清后细胞会启动“自救模式”:Caspase-3水平显著提升💥,LC3-II斑点急剧增多。这为研究抗癌药物或自噬诱导剂提供了便捷的模型。
3. 提升转染效率
细胞在“代谢慢”的状态下,质粒和siRNA的转染效率显著提高。经过一夜“饥饿”处理后,HEK293T细胞的转染效率从30%提升到80%,即使是难以处理的悬浮细胞也能顺利转染🤝。
4. 信号通路背景清零
血清中的生长因子可能干扰信号通路的精确分析。通过先进行12小时的“饥饿”处理,随后加入EGF/胰岛素进行刺激,可以更清晰地对比p-ERK与p-AKT的灰度值🔍。
5. 模拟体内微环境
肿瘤研究与干细胞研究中,低营养和低氧条件是常态。选用0.5%血清能有效复刻这些条件,让癌细胞的糖酵解能力变得活跃,同时容易维持干细胞的干性表型🔥。
操作步骤:
1. **预处理**:当细胞达到70-80%汇合时,使用PBS轻柔洗涤两遍,以去除残留的血清“余味”🚿。
2. **饥饿**:更换为0-1%血清的培养基,贴壁细胞静置,悬浮细胞则降低转速以防沉淀🌀。
3. **唤醒**:在实验前加入正常血清,细胞会迅速恢复至“满血复活”的状态,后续的转染或给药可顺利进行⚡️。
通过以上方法,细胞培养的效果和实验设计可以得到显著提升。在使用此培养策略时,不妨考虑结合人生就是博-尊龙凯时的生物医疗服务,以促进您的研究和实验进展。