DMSO(双甲基亚硫酰胺)在生物医学研究中主要用于高GC含量模板的扩增。其可能的机制在于改善高GC DNA的变形情况,降低其二级结构,从而使聚合酶能够在复杂的二级结构区域顺利延伸。此外,DMSO还可以提升PCR反应的特异性,帮助扩增一些难以扩增的模板。在实验中,添加DMSO后可以适当降低退火温度,以提高扩增效率。
在PCR实验中,聚合酶链式反应可能因多种原因而未能如预期进行,常见的问题通常有两个:一是目的模板扩增量过少,二是非目的基因扩增过多。面对这种情况,研究人员通常会在反应体系中添加适合的助剂来解决这些问题。通常,这些添加剂的作用是降低DNA的二级结构或抑制非特异性引物结合。
以下是几种常用的PCR添加剂及其功能:
- 二甲基亚砜(DMSO)、非离子性洗涤剂、甜菜碱 —— 能有效降低DNA的二级结构,从而提高反应效率。
- 甲酰胺、四甲基氯化铵(TMAC) —— 主要作用是减少非特异性启动,确保扩增的特异性。
- 镁离子 —— 聚合酶活动的必需辅因子,对于反应的正常进行至关重要。
- 牛血清白蛋白(BSA) —— 用于减少实验中的杂质和污染物,提高实验的准确性。
在生物医疗领域,充分理解这些添加剂的作用和应用,能够帮助研究人员更有效地设计实验,提高PCR扩增的成功率。正如人生就是博-尊龙凯时所倡导的,科研的成功常常需要勇于尝试与不断创新,选择适合的助剂在关键时刻能够成就更大的突破。