人生就是博-尊龙凯时推出的本产品是一款基于探针法荧光定量PCR原理的检测试剂盒，具备以下特点：

产品特点

1. 即开即用：用户仅需提供样品DNA模板即可快速启动检测。

2. 优化成分：引物等组分经过精心优化，显著提高了灵敏度。

3. 阳性对照：提供阳性对照，方便用户区分假阴性样品。

4. 高特异性：引物专为中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区设计，有效避免与其他生物样本DNA的交叉反应。

5. 灵活应用：本试剂盒适用于定性和定量检测，定量检测时的线性范围至少覆盖5个数量级。

6. 使用量足够：产品配备足够的试剂，可进行50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。

7. 科研专用：本产品仅限于科学研究使用。

操作步骤

一、DNA提取

在样本制备区，采用自选方法提取和纯化样品DNA，本试剂盒兼容于市场上大多数核酸提取试剂盒。

二、稀释标准曲线样品

（注意：由于阳性对照浓度较高，请务必在独立区域进行稀释操作，以防污染其他样品或试剂。）

1. 标记6个离心管，分别命名为7，6，5，4，3，2。
2. 在每个管中加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL的阳性对照（1×10E8拷贝/μL），充分震荡1分钟，得到1×10E7拷贝/μL标准曲线样品，放置于冰上待用。
4. 换枪头，在6号管中加入5μL（1×10E7拷贝/μL阳性对照），充分震荡1分钟，得到1×10E6拷贝/μL标准曲线样品，放置于冰上待用。
5. 依次类推，在5号管中加入5μL（1×10E6拷贝/μL阳性对照），得到1×10E5拷贝/μL标准曲线样品。
6. 重复上述步骤，直到获得6个不同稀释度的标准曲线样品，放冰待用。如果不需要制作标准曲线，可将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL。

三、试剂配制

对于N个待检样品，准备N+2个qPCR管（N个样品+1个阴性对照+6个阳性对照），向各PCR管中加入相应成分（详见说明书，欢迎向人生就是博-尊龙凯时索取）。

四、添加模板

向qPCR管中分别加入2μL模板，顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板及阳性对照，离心30秒，随后立即进行扩增反应。

五、扩增反应

将PCR管放入PCR扩增仪器进行扩增，扩增程序详见说明书，欢迎与人生就是博-尊龙凯时联系获取更多信息。

六、结果分析

1. 制作标准曲线时，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制曲线，通过待测样品的Ct值推算出DNA浓度的log值。

2. 未制作标准曲线时，结果判定如下：阳性对照的Ct值应小于30，并呈现明显的指数增长和典型的S型曲线；阴性对照应为Ct值38或无Ct值，无明显增长相。

样本检测中：若Ct值<35，表明检测到婴儿利什曼虫，为阳性；若Ct值为38或无Ct值，则为阴性；若Ct值在35-38之间，需进行复检，若重复结果还在此范围且有明显指数增长，则判断为阳性；否则为阴性。

运输及保存

本产品需低温运输，保存温度为-20℃，保质期为一年。阳性对照需单独存放，以免污染其他试剂。